接種是食用菌生產中的關鍵環節之一，如果接種技術不過關，即會造成雜菌污染，成活率低而前功盡棄，更談不上栽培了。無論是菌種分離、傳代還是擴繁，都要在無菌條件下嚴格按照無菌操作規程進行。具體要點如下：
1 人員素質
1.1 接種人員要具備認真、細致、自覺、對事業負責的精神。
1.2 接種人員要牢固樹立無菌觀念，不能存在僥幸心理，切不可麻痹大意。
1.3 接種人員具備鑒別菌種優勢的能力，不合格的菌種不能用于生產。
2 環境消毒
2.1 新制作的或是閑置時間超過15天的接種箱，首次使用前，箱體內、外需用0.1%消霉樂或2%來蘇兒徹底刷洗消毒。并必須用甲醛高錳酸鉀熏蒸消毒。
2.2 閑置超過30天的接種室和緩沖間重新使用前，墻壁需用2%來蘇兒噴濕消毒。對新改建或閑置3個月以上沒用的接種室，使用前，室內墻壁要用石灰漿粉刷，水泥地面用清水沖刷。并必須用甲醛高錳酸鉀熏蒸消毒。最好用20%氫氧化鈉噴灑。
3 空間消毒
將待接種的培養基放入接種箱或接種室后，需對箱或室內進行空間消毒。
3.1 如果是母種傳代或接種量少的原種，可利用接種箱同時放入所用的接種工具，然后用化學藥物熏蒸和紫外線照射進行空間消毒60分鐘。
3.2 如果是量大的原種或三級種生產，培養基放入接種室，同時放入所用的接種工具，再用化學藥物熏蒸，同時配合紫外線照射進行空間消毒60分鐘左右。
3.3 緩沖間內放置作業服、消毒水、面盆等，接種前要在緩沖間內做好一切準備工作。進入前開啟紫外線燈照射60分鐘，離開緩沖間進入接種室時仍需開啟紫外線燈照射，直至接種結束。
3.4化學藥物熏蒸方法：甲醛每立方米17毫升加14克高錳酸鉀熏蒸1.5小時后接種，之后連續4次可用氣霧消毒盒熏蒸，二著交替使用。每次熏蒸前用消霉樂噴灑一次。
4 攜帶物消毒
4.1 將母種試管或原種瓶（袋）的棉塞齊管或瓶口剪去，母種試管用75%酒精棉擦洗外壁，原種瓶（袋）用2%來蘇水或0.1%克霉靈水清洗外壁，然后隨接種人員帶入接種箱（室）。
4.2 接種人員經過緩沖間更衣、洗手進入接種室后不得隨便出入，盡量少走動和避免空氣對流。
5 殺菌
利用酒精火焰進行必要的殺菌。
5.1 首先將接種工具（鉤、鏟、刀等）在酒精燈火焰上燒灼后，置于清潔的空試管內冷卻備用。
5.2 將試管母種或原種瓶放在萬能夾上，旋轉式取下棉塞，右手端起酒精燈，讓火焰接觸管口或瓶口，左手將試管或原種瓶慢慢旋轉3～4周，然后將試管或原種瓶固定牢。
6 接種
母種分離、傳代或擴繁時，試管口要控制在離酒精火焰10cm范圍內進行操作。
6.1 用殺菌后的備用接種鉤，除去母種斜面的尖端部分以及中央的母種塊，隨后將接種鉤放回母種試管。
6.2 左手持預接種的試管培養基，管口稍向下傾斜，用右手小拇指和無名指、食指和中指持接種鉤，從母種試管內鉤取直徑約2mm大小的種塊，放入預接種培養基斜面中央，抽出接種鉤，放回母種試管，輕燎右手所持棉塞，旋轉式塞入接過菌的試管，由右手放到適當位置，連續完成所有預接種試管。
注意：①每次接種時間最長不得連續超過2小時。②操作時，接種工具尖端和種塊不能接觸到管口和外部其它物體。工具尖端碰到外面物體要重換工具，種塊碰到外面物體則作廢。③一般用種量：每支試管母種可擴繁一級種30-40支左右；擴接原種6～8瓶。
7 安全
7.1 點燃的酒精燈不能靠近棉塞、塑料等易燃物。
7.2 點燃的酒精燈要放牢，在操作過程中嚴防將酒精燈碰翻，以免引起火災。
7.3 接種箱或接種室利用化學藥物進行空間消毒時，要計算空間容積，按照用藥說明使用，不許任意加大用藥量，避免造成藥害。
7.4 紫外線可損傷人體，特別是可引起電光性眼炎。因此，不要在開啟紫外線燈的情況下工作，更不能直視正在開啟的紫外線燈。
7.5各種消毒藥劑要嚴格選擇生產廠家，以免使用偽劣藥造成生產損失。