【作者】方星 師亮 徐穎潔 趙明文

【機構】南京農業大學生命科學學院農業部農業微生物環境工程重點開放實驗室 南京農業大學作物遺傳與種質創新國家重點實驗室

【摘要】靈芝Ganoderma lucidum是我國傳統的藥用真菌,三萜類物質是靈芝的主要生物活性成分,甾醇14α-脫甲基酶是三萜合成途徑中的關鍵酶。根據已報道其他物種甾醇14α-脫甲基酶的氨基酸保守序列設計簡并引物,獲得靈芝甾醇14α-脫甲基酶特異基因片段,并進一步獲得靈芝甾醇14α-脫甲基酶基因的全長DNA和cDNA序列。其中DNA序列長1,981bp,cDNA序列長1,635bp。結構基因編碼蛋白包含544個氨基酸,分子量為61.99kDa,等電點為6.36。將甾醇14α-脫甲基酶基因的cDNA序列克隆到靈芝超量表達載體pGl-GPD中,利用農桿菌介導的轉化法實現了甾醇14α-脫甲基酶基因在靈芝內的超量表達。轉化子的甾醇14α-脫甲基酶基因在轉錄水平表達量增加,三萜含量增加。進一步研究發現,三萜合成途徑的關鍵酶基因Gl-aact、Gl-hmgr及Gl-ls的轉錄表達量也有所增加。  

【基金】國家自然科學基金(No.30970042&30871767)；

【關鍵詞】靈芝; Agrobacterium tumefaciens介導轉化; 超量表達; 三萜合成;