【作者】方星 師亮 徐穎潔 趙明文

【機(jī)構(gòu)】南京農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院農(nóng)業(yè)部農(nóng)業(yè)微生物環(huán)境工程重點(diǎn)開(kāi)放實(shí)驗(yàn)室 南京農(nóng)業(yè)大學(xué)作物遺傳與種質(zhì)創(chuàng)新國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室

【摘要】靈芝Ganoderma lucidum是我國(guó)傳統(tǒng)的藥用真菌,三萜類(lèi)物質(zhì)是靈芝的主要生物活性成分,甾醇14α-脫甲基酶是三萜合成途徑中的關(guān)鍵酶。根據(jù)已報(bào)道其他物種甾醇14α-脫甲基酶的氨基酸保守序列設(shè)計(jì)簡(jiǎn)并引物,獲得靈芝甾醇14α-脫甲基酶特異基因片段,并進(jìn)一步獲得靈芝甾醇14α-脫甲基酶基因的全長(zhǎng)DNA和cDNA序列。其中DNA序列長(zhǎng)1,981bp,cDNA序列長(zhǎng)1,635bp。結(jié)構(gòu)基因編碼蛋白包含544個(gè)氨基酸,分子量為61.99kDa,等電點(diǎn)為6.36。將甾醇14α-脫甲基酶基因的cDNA序列克隆到靈芝超量表達(dá)載體pGl-GPD中,利用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化法實(shí)現(xiàn)了甾醇14α-脫甲基酶基因在靈芝內(nèi)的超量表達(dá)。轉(zhuǎn)化子的甾醇14α-脫甲基酶基因在轉(zhuǎn)錄水平表達(dá)量增加,三萜含量增加。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn),三萜合成途徑的關(guān)鍵酶基因Gl-aact、Gl-hmgr及Gl-ls的轉(zhuǎn)錄表達(dá)量也有所增加。  

【基金】國(guó)家自然科學(xué)基金(No.30970042&30871767)；

【關(guān)鍵詞】靈芝; Agrobacterium tumefaciens介導(dǎo)轉(zhuǎn)化; 超量表達(dá); 三萜合成;