1、 培養室應事前滅菌， 即用石灰粉刷墻壁， 用甲醛和高錳酸鉀混合進行熏蒸消毒； 培養過程中， 每周用5%石炭酸溶液噴灑墻壁、空間和地面， 連續噴2次， 以除蟲滅菌。
2、 溫度和濕度要適宜。培養室溫度要先高后低。菌絲萌發時， 溫度在25～28℃為宜。10天后， 溫度降至22～24℃ ， 不超過25℃ 。室內空氣相對濕度控制在55%～70%。后期如雨水多， 在培養場地撒些石灰， 以降低空氣相對濕度。
3、光線要偏暗。在菌絲體生長階段， 培養室的光線要接近黑暗， 門窗用黑布遮光或糊上報紙或瓶(袋) 外套上牛皮紙、報紙進行遮光， 有利于菌絲生長。當菌絲發滿瓶(袋) 時， 要清除培養室門窗的遮光物， 增加光照3～5天； 如光線不足， 可用電燈照射， 以補充光源， 來刺激黑木耳原基形成。
4、空氣要新鮮。黑木耳是好氣性菌類， 在生長發育過程中， 要始終保持室內空氣新鮮， 每天通風換氣1～2次， 每次30分鐘左右， 促進菌絲的生長。第五， 及時檢查雜菌， 防止污染。在菌絲培養過程中， 料袋常有雜菌侵染， 要及時進行檢查， 如發現有菌斑 要用0.2%多菌靈或1%甲醛溶液注射菌斑， 然后貼上膠布， 控制雜菌的蔓延。
