母種培養
母種培養是指用組織分離或孢子分離得到的菌種。母種培養基的制備通常用土豆洋菜培養基。配制1000毫升培養基,用土豆200克、瓊脂18-20克、葡萄糖20克。
做法:先將土豆洗凈去皮,切成蠶豆粒小塊,放入1000毫升水中煮沸30分鐘,用6-8層紗布過濾,補足損失水分。將瓊脂加入溶化后,加進溶解的糖,補充水分至1000毫升。以后分裝試管,每管裝量1/5-1/4,并加棉塞、包紙。在1.2公斤壓力下滅菌30分鐘,趁熱擺成斜面。冷卻后置于25℃-27℃條件下觀察無雜菌即可接種。一支母種可轉管25-30支。
將無菌操作下接種的試管置于25℃左右恒溫條件下培養,半個月左右菌絲可長滿試管。培養過程中應注意除掉雜菌污染的試管。培養好的母種移入冰箱,在4℃條件下保存半年,或室溫下保存三個月。
原種培養
原料可用木屑或棉籽皮。木屑培養基配方:木屑78%,麥麩或米糠20%,糖1%,石膏1%。棉籽皮培養基配方:用50公斤棉籽皮加土豆浸出汁水3%,(1.5公斤土豆切成泥煮沸30分鐘的濾液),糖0.1%,硫酸鎂0.1%。
做法:培養料加水拌均勻,濕度以用手緊握料,指縫內見水珠而滴不下來為宜,一般料水比1:1.2-1.3。然后裝瓶,裝瓶方法是邊裝邊將瓶輕輕地抖動,使瓶上下部緊密適中,裝至瓶肩部將料壓平,洗凈瓶口內外的培養料,加棉塞包紙捆好放進高壓消毒鍋內進行滅菌,在1.5公斤壓力下滅菌一小時。冷卻后,在無菌操作條件下接種。將試管中母種接入瓶中,一支母種可接4-5瓶原種,接種后置于25℃恒溫條件下培養一個月左右菌絲可長滿瓶,即為原種。
栽培種培養
栽培種的制備實際上就是原種進行一次擴大培植。栽培種木屑培養基的配方同原種培養的配方。棉籽皮培養基的配方也同原種培養的配方。裝瓶后滅菌,在無菌條件下,把原種菌種接入栽培種瓶內。一瓶750毫升原種可接80-100瓶栽培種。接種后置于25℃恒溫條件下培育一個月左右,長滿瓶后即可播種。在培養原種和栽培種時,接種后每隔2-3天要檢查一次,直至菌絲長滿料面后每周檢查一次。揀出有雜菌污染的菌種,并遠離培養室處理掉。