任何一個香菇品種，經過組培或孢子培養制成原始母種（保藏種）由原始母種轉擴，即為生產母種。
生產母種通常用PDA培養基，選用180×18毫米試管，制成斜面試管接種而成。PDA培養基配方：
土豆（去皮、去芽） 200克（也可用淀粉，用量為6克/1000毫升）
葡萄糖 20克
瓊脂 20克
磷酸二莖鉀 2克
復合維生素B 2克
旦白棟 5克
硫酸鎂 0.3克
加水 1300毫升
上述配方可配制1000毫升溶液培養基。配制方法：土豆去皮、去芽，稱重，切成0.5厘米厚片，放入24公分鋁鍋中，加入1300毫升水，煮沸5~8分鐘，用雙層紗布過濾，取其濾液重新倒入鍋中加入瓊脂，煮沸后轉小火，使瓊脂溶化，將維生素B在研體內加入少量水研磨成稀漿，再倒入鍋中，同時，加入葡萄糖、磷酸二莖鉀、旦白棟和硫酸鎂，攪勻后趁熱分裝試管，裝入試管內的溶液高度以試管的1/4為宜，塞上棉塞，置于高壓滅菌鍋中1.5個大氣壓，滅菌30分鐘，或用蒸鍋蒸75分鐘，滅菌后趁熱擺斜面，培養基斜面長度以占試管的3/4弱為宜。如棉塞潮濕，要進行烘烤3~5小時，否則，潮濕棉塞易染雜菌。斜面培養基試管置干燥處3天后，若斜面無雜菌形成，表明滅菌徹底，即可用于接種。
接種：通常在接種箱內進行。先將斜面試管放入接種箱內，再用75%酒精擦接種及待接菌種試管，放入接種箱，同時放入酒精燈、接種針，用2~5克煙霧劑點燃煙熏30分鐘后，即可接種。接種前，先點燃酒精燈，用75%酒精擦手，用酒精燈火燒接種針，冷卻后，放入待接菌種試管內，左手拖握菌種試管和斜面試管、右手用姆指、食指和中指象拿筆一樣握接種針，在菌種試管內挑取米粒大小菌塊放入斜面試管中，塞上棉塞即可，一支菌種試管可接50~60以斜面試管。接完種后，每5支斜面試管捆包在一起，放入培養室內，在23~25℃條件下，12~15天長滿試管斜面，該即為生產母種。
