于曉玲; 林俊芳; 郭麗瓊; 王樹昌
中國熱帶農業科學院熱帶作物生物技術國家重點實驗室; 中國熱帶農業科學院熱帶作物生物技術國家重點實驗室; 中國熱帶農業科學院熱帶作物生物技術國家重點實驗室; 中國熱帶農業科學院熱帶作物生物技術國家重點實驗室 熱帶生物技術研究所?？?71101 ; 熱帶生物技術研究所海口571101; 華南農業大學食品學院生物工程系; 廣州510640 ; 熱帶生物技術研究所?？?71101; 華南農業大學食品學院生物工程系; 廣州510640 ; 熱帶生物技術研究所?？?71101
【中文摘要】 以香菇基因組DNA為模板,利用PCR技術克隆了香菇1個ras啟動子Lras,2個gpd啟動子Lgpd1和Lgpd2。這3個啟動子的大小分別為715bp、1056bp和611bp,與已報道的ras和gpd啟動子的同源性很強。對這3個啟動子的分析結果表明,它們都含有豐富的啟動子順式作用元件。將這些啟動子片段分別與GUS基因連接構建了表達載體,并將這些表達載體導入草菇菌絲體中,檢測其活性,最終顯示3個片段都有啟動GUS基因表達的能力,其中Lgpd1啟動子活性最強,Lras啟動子次之,Lgpd2最弱。
【英文摘要】 The promoter fragments of Lras,Lgpd1 and Lgpd2 were isolated from genomic DNA of Lentinus edodes by PCR amplification.DNA sequencing results showed that these promoter fragments have 715bp,1056bp and 611bp respectively.Blastn analysis results revealed that Lras,Lgpd1 and Lgpd2 have high homologous with reported promoters,ras and gpd.Analysis results showed that they all contain many important cis-acting regulatory elements.Fragments of Lras,Lgpd1 and Lgpd2 were constructed respectively with pCAMBIA1301 which 35S promoter was deleted.Then the new expression plasmids containing GUS reporter gene were induced into Volvariella volvacea by protoplast electroporation.GUS histochemistry assay results showed that Lgpd1 had the strongest promoter activity,Lras had stronger activity and Lgpd2 had slight activity.
【中文關鍵詞】 香菇; ras啟動子; gpd啟動子; 原生質體轉化; GUS基因
【英文關鍵詞】 Lentinus edodes; ras promoter; gpd promoter; Protoplast transformation; GUS
【基金】國家自然科學基金資助項目“抗冷凍蛋白基因遺傳轉化草菇的研究”(編號:39960050);; “草菇冷凍脅迫誘導表達基因及其啟動子的克隆分離”(編號:30060054);; “食用菌外源基因表達系統的建立”(編號:30371000);; 廣東省自然科學基金資助項目“食用菌外源基因表達系統的建立”(編號:032239)的部分研究內容
【文獻出處】 食用菌學報,Acta Edulis Fungi,編輯部郵箱,2005年03期 【DOI】CNKI:SUN:SYJB.0.2005-03-002