草菇噬菌體基因文庫的構建

The Construction of Genomic DNA Library of Volvariella volvacea by Lambda GEM- 11 Phage

李南羿　姚占芳　陳明杰　

摘　要：采用CTAB/NaCl法提取草菇基因組DNA,通過限制性內切酶Sau 3AI對純化的草菇基因組DNA進行部分酶切,獲得大小為20kb左右的DNA片段.這些DNA片段再次純化后,與經Eco R I和Bam H I雙酶切消化的Lambda GEM-11噬菌體DNA載體臂相連,以大腸桿菌(E.coli)LE392為寄主細胞,構建了草菇(Volvariella volvacea)基因文庫,所構建基因文庫效價為1.5×105 pfu/mL.

關鍵詞：草菇;噬菌體;基因文庫

分類號：S646　文獻標識碼：A

基金項目：本項目由上海市農委科技攻關重點項目資助,項目編號:農科攻字(98)第01-14號

作者簡介：陳明杰,本文的通信作者.Email:mingjiechen@china.com

作者單位：李南羿（河南農業大學微生物教研室,鄭州,450002）　

　　　　　姚占芳（河南農業大學微生物教研室,鄭州,450002）　

　　　　　陳明杰（農業部食用菌遺傳育種重點開放實驗室,上海市農業遺傳育種重點開放實驗室,上海市農業科學院食用菌研究所,上海,201106）　

參考文獻：

［1］Chang ST, Hayes WA. Volvariella volvacea. New York: Academic Press, 1978. 573～605.

［2］Graham GC, Henry RJ. Preparation of fungal genomic DNA for PCR and RAPD analysis. New York: R.Springer, 1996. 29～34.

［3］Chen MJ. Chiu SW. Chang ST. Conrstruction of a genomic library for Volvariella wlvacea.食用菌學報,1994,1(2):1～4.

［4］金冬雁,黎孟楓.分子克隆實驗指南.北京:科學出版社,1992.75～166