中國栽培白靈菇學名的訂正
黃晨陽1, 陳強1, 鄧旺秋2, 李泰輝2, 高巍1, 張金霞1*
摘要：采用形態學方法對采集于新疆野生的阿魏蘑標本進行分類鑒定，結果表明其形態學特征符合刺芹側耳托里變種Pleurotus eryngii var. tuoliensis的特征范圍，它與歐洲已報道的Pleurotus nebrodensis有明顯的差異。此外本研究還采用分子生物學方法對從該野生樣品分離的菌株CCMSSC 02514進行了rDNA ITS序列分析，結果表明它與我國栽培白靈菇菌種CCMSSC 00973、KH5和AFRL 6022完全相同，以此構建系統發育樹，將我國栽培白靈菇種質與意大利的Pleurotusnebrodensis、Pleurotus eryngii var. ferulae以及來自荷蘭的Pleurotuseryngii等截然分為兩組。因此，形態學和rDNA ITS序列分析結果支持我國栽培的白靈菇與歐洲的Pleurotusnebrodensis為不同種，我國的白靈菇是刺芹側耳獨立進化的一個分支，其名稱應該為刺芹側耳托里變種Pleurotus eryngii var. tuoliensis。
關鍵詞：白靈側耳；鑒定；形態學；ITS
Correct Name for Cultivated Bai-Ling-Gu in China
HUANG Chen-yang1, CHEN Qiang1, DENG Wang-qiu2, LI Tai-hui2, GAO Wei1, ZHANG Jin-xia1
(1Institute of Agricultural Resources and Regional Planning, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100081;
2Guangdong Provincial Public Laboratory of New Microbial Application Technology, Guangdong Key Laboratory of Microbial Culture Collection and Application, Guangdong Institute of Microbiology, Guangzhou 510070)
Abstract:A wild A-Wei-Mo specimen collected from Xinjiang was identificated with morphological methods. The results showed that it was consistent with the morphological characteristics of Pleurotus eryngii var. tuoliensis, but different from those of Pleurotus nebrodensis reported in Europe. In addition, the strain CCMSSC 02514 isolated from the wild mushroom specimen was analyzed with molecular menthods. Based on rDNA ITS sequences from the phylogenetic tree, the relationship among Bai-Ling-Gu in China, Pleurotus nebrodensis and Pleurotus eryngii var. ferulae in Italy, and Pleurotus eryngii are analyzed. The rDNA ITS sequences of CCMSSC 02514 and Pleurotus eryngii var. tuoliensis AFRL 6022 are identical. Combined with morphology and rDNA ITS sequence analysis, we considered that Bai-Ling-Gu in China is different from the European Pleurotus nebrodensis, and the former is a branch of Pleurotus eryngii evolved independently in China. The scientific name for the Chinese Bai-Ling-Gu in China should be Pleurotus eryngii var. tuoliensis.
Key words: Pleurotus eryngii var. tuoliensis; Identification; Morphology; ITS
Pleurotus nebrodensis（Inzenga）Quél.最早采于意大利西西里，Inzenga[1]將其定名為Agaricus nebrodensisInzenga，Quélet[2]將其組合為Pleurotus nebrodensis（Inzenga）Quél.。Venturella 等[3]野外調查發現，意大利西西里分布的綿果芹植物Cachrys ferulacea根上發生的側耳才是模式標本記載的P. nebrodensis，其發生與C. ferulacea的自然分布相關，嚴格弱寄生或腐生在海拔1200~2000m的C. ferulacea上，C. ferulacea是P. nebrodensis的唯一宿主。真菌分類學家對發生在C. ferulacea上的這一真菌的分類地位一直有著分歧，分別將其作為刺芹側耳的變種P. eryngii var. nebrodensis[4]或獨立物種P. nebrodensis[3,5]。
自然生長在我國新疆的阿魏Ferula sinkiangensis K.M. Shen根上的側耳被當地人稱為阿魏蘑，自然分布于新疆塔城、阿爾泰、木壘等地有新疆阿魏分布的荒灘上，分布海拔800~900m[6]。最初記載為Pleurotus ferulae Lanzi[7]，后來根據其子實體形態和菌絲培養特征的差別，又有刺芹側耳阿魏變種Pleurotus eryngii var. ferulae Lanzi、刺芹側耳托里變種Pleurotus eryngii var. tuoliensis C.J. Mou[6]、刺芹側耳白阿魏變種Pleurotus eryngii (DC.) Quél.var. nebrodensis Inzenga的記載[8]。而“白靈菇”這一商品名稱，來自1997年北京金信食用菌有限公司從新疆購進阿魏蘑菌袋，在北京大面積出菇成功，卯曉嵐先生鑒定其為白靈側耳Pleurotus nebrodensis，并記載于2000年出版的《中國大型真菌》中[9]。但是單孢雜交配對表明阿魏側耳與白靈側耳屬于同一種下的變種[10]。
目前，我國栽培白靈菇學名采用較多的是P. nebrodensis，然而Kawai等[11]對我國的白靈菇與意大利的P. nebrodensis及德國和捷克的P. eryngii進行交配、栽培及rDNA ITS序列比對，認為我國的白靈菇與P. nebrodensis不同，是P. eryngii的一個變種。
本研究以新疆野生的阿魏蘑標本為材料，進行了形態鑒定，并將其rDNA ITS序列與我國栽培白靈菇及國外的相關菌株進行比對，探討我國栽培白靈菇的分類學名稱。
1 材料與方法
1.1 材料
野生阿魏蘑材料為2009年4月采集于新疆塔城地區裕民縣，并分離獲得其菌株，菌種保藏于國家標準菌株庫（China Center for Mushroom Spawn Standards and Control，CCMSSC），菌種保藏號為CCMSSC 02514；子實體標本保藏于廣東省微生物研究所真菌標本館（Herbarium of Guangdong Institute of Microbiology，GDGM），標本號為GDGM 27082。在GenBank中下載P. nebrodensis、P. eryngii var. ferulae、P. eryngii、P. eryngii var.tuoliensis、P. ostreatus的rDNA ITS序列，菌株來源及其ITS序列的GenBank登錄號見表1。
表1 供試菌株及其ITS登錄號
Table 1 The locality and ITS sequence accession numbers of tested strains
|
菌株號
Strain no.
|
拉丁學名
Species
|
來源
Locality
|
GenBank登錄號
GenBank accession no.
|
|
CCMSSC 02514
|
P. eryngii var. tuoliensis
|
新疆 Xinjiang
|
HM 777041
|
|
CCMSSC 00973
|
P. nebrodensis
|
新疆 Xinjiang
|
FJ873701.1
|
|
KH5
|
P. nebrodensis
|
新疆 Xinjiang
|
FJ572270.1
|
|
AFRL 6022
|
P. eryngii
|
河北←新疆 Hebei←Xinjiang
|
AB286171.1
|
|
DS201
|
P. nebrodensis
|
意大利 Italy
|
AB286162
|
|
DS260
|
P. nebrodensis
|
意大利 Italy
|
AB286156
|
|
DS247
|
P. eryngii var. ferulae
|
意大利 Italy
|
AB286158
|
|
CBS 613.91
|
P. eryngii
|
CBS, the Netherlands
|
EU424296
|
|
CBS 375.51
|
P. ostreatus
|
CBS, the Netherlands
|
EU424310
|
1.2 方法
1.2.1形態觀察 在野外觀察和記錄新鮮樣品的外觀形態特征，并將樣品于40~50℃下烘干。用刀片將樣品組織塊切成薄片，置于5%的氫氧化鉀溶液中復水；小心輕按組織塊，除去組織塊中的空氣，蓋上蓋玻片；在光學顯微鏡下觀察樣品的顯微特征。擔孢子的長或寬以(a)b~c(d)表示，90%的測量數值落在b~c之間，a、d分別為測量數據中的最小值和最大值；擔孢子的長寬比用Q表示，而Q為多個擔孢子長寬比的算術平均值。
1.2.2總DNA的提取 野生菌株子實體進行組織分離，獲得雙核菌絲純培養物，培養基上隔膜培養，刮取菌絲體。采用CTAB法提取基因組DNA，0.8%瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA質量，紫外分光光度計檢測DNA濃度，于-20℃保存。
1.2.3 rDNA ITS序列的獲得 反應體系采用黃晨陽等[12]的方法，引物合成及測序由上海生工生物工程技術服務有限公司合成。
1.2.4系統發育分析 以糙皮側耳Pleurotus ostreatus (Jacq.) P. Kumm.為外群，進行系統發育關系分析。采用MEGA 4.0[13]對rDNA ITS序列片段進行比對，人工調整比對結果，用鄰近法和最大簡約法構建系統發育樹。
2結果與分析
2.1 形態特征
菌蓋匙形、扇形，菌蓋直徑3.2cm，白色夾乳酪斑，邊緣內卷，中間凸，不粘，菌蓋表面有塊鱗，龜裂，菌肉白色，厚。菌褶白色，密，延生，寬度1~2mm。菌柄側生，白色，長2.9cm，粗0.7cm，上部粗而基部較細，實心（圖1）。孢子無色，橢圓形和長橢圓形，有油滴，大小為（9）10~14 μm×（4.2）5~6 μm。Q = 2.0~2.5 (Q= 2.2 ± 0.21)
圖1 刺芹側耳托里變種CCMSSC 02514的子實體（GDGM 27082）
Fig.. 1 Fruitbodies of P. eryngii var. tuoliensis (GDGM 27082).
生境：寄生或腐生于傘形科植物新疆阿魏F. sinkiangensis的根上。
研究標本信息：采集于新疆塔城地區裕民縣磚廠附近，海拔735m，2009年4月22日，采集人陳強，標本號GDGM 27082，標本保存于廣東省微生物研究所真菌標本館。
2.2 系統發育分析
經過MEGA 4.0比對和人工調整，最后得到615個同源位點，鄰近法和最大簡約法構建的系統發育樹結構一致。以最大簡約法生成的樹為例，作為外群的糙皮側耳與其他8個菌株完全分開。而來自新疆的4個菌株聚在同一組，來自意大利的P. nebrodensis、P. eryngii var. ferulae與來自CBS的P. eryngii聚為另一組，兩組的節點支持率分別達到100%和96%。在組內意大利的P. nebrodensis和P. eryngii var. ferulae聚為一小組，再與荷蘭的P. eryngii聚為同組（圖2）。
圖2 基于ITS序列的系統發育樹（最大簡約法）分析
Fig. 2 The molecular phylogenetic analyses based on ITS with maximum parsimony method
3討論
從形態學上，標本GDGM 27082主要特征是子實體扇形，白色，菌蓋表面龜裂，菌柄側生，孢子大小為（10~14）μm×（5~6）μm，符合刺芹側耳托里變種P. eryngii var. tuoliensis的特征范圍[6]；且與P. eryngii var. tuoliensis同采集于傘形科植物新疆阿魏F. sinkiangensis上，根據國際植物命名法規（International Code of Botanical Nomenclature, ICBN）的規定，菌株CCMSSC 02514應使用學名刺芹側耳托里變種P. eryngii var. tuoliensis。而歐洲的P. nebrodensis擔孢子的大小為（15~18）μm×（6~8）μm[3]；阿魏側耳P. ferulae菌蓋初期褐色，菌柄為中至偏生，擔孢子大?。?/span>12~14）μm×（5~6）μm[14]；刺芹側耳P. eryngii菌蓋墨灰色至淡黃色，擔孢子大小（9.58~12.5）μm×（5~6.25）μm[8]。從形態學及擔孢子特征看，P. eryngii var. tuoliensis與以上3種側耳是不同的。
基于rDNA ITS序列構建的系統發育樹，CCMSSC 02514與我國栽培白靈菇CCMSSC 00973、KH5的ITS序列完全相同，與菌株AFRL 6022的ITS序列也完全相同，雖然在GenBank中提交的學名為P. eryngii，但Kawai等[11]在文中將AFRL 6022作為P. eryngii var. tuoliensis研究分析。我國栽培白靈菇與意大利的P. nebrodensis、P. eryngii var. ferulae及來自CBS的P. eryngii遺傳差異比較大。
結合形態學觀察和rDNA ITS序列分析，我國的白靈菇與歐洲的P. nebrodensis應為不同的物種，它是刺芹側耳在中國獨立進化的一個分支，其名稱應該為刺芹側耳托里變種P. eryngii var. tuoliensis。戴玉成等[15]在中國食用菌名錄中也曾將白靈側耳也處理為P. nebrodensis，實際上也應該為刺芹側耳托里變種P. eryngii var. tuoliensis。
[參考文獻]
[1] Inzenga G. Nuova specie di agarico del Prof. Giuseppe Inzenga [J]. Giorn Reale Ist Incoragg Agric Sicil Palermo, 1863, 1: 161-164
[2] Quélet L. Enchiridion Fungorum in Europa Media et Praesertim in Gallia Vigentium [M]. Paris, 1886: 148
[3] Venturella G, Zervakis G, Rocca S L. Pleurotus eryngii var. elaeoselini var. nov. from Sicily [J]. Mycotaxon, 2000, 76: 419-427
[4] Moser M. Keys to Agarics and Boleti (Polyporales, Boletales, Agaricales, Russulales) [M]. London: Roger Phillips, 1983
[5] Candusso M, Basso M T. Comparative analysis of Pleurotus eryngii and P. nebrodensis [J]. Docum Mycol, 1995, 100: 119-128
[6] 牟川靜, 曹玉清, 馬金蓮. 阿魏側耳一新變種及其培養特性[J]. 真菌學報, 1987, 6(3): 153-156
[7] 鄧叔群. 中國的真菌[M]. 北京：科學出版社, 1963: 580
[8] 黃年來. 18種珍稀美味食用菌栽培[M]. 北京：中國農業出版社, 1996
[9] 賈身茂, 秦淼. 我國白阿魏蘑的馴化與栽培[J]. 中國食用菌, 2006, 25(3): 3-7
[10] 劉洲君, 王卓仁, 肖美麗, 等. 白靈菇與阿魏側耳雜交F1代培養性狀觀察 [C]//中國（廣水）食用菌標準化生產研討會暨珍稀菇品(白靈菇)交易會論文集, 2005
[11] Kawai G, Babasaki K, Neda H. Taxonomic position of a Chinese Pleurotus “Bai-Ling-Gu”: it belongs to Pleurotus eryngii (DC.: Fr.) Quél. and evolved independently in China [J]. Mycoscience, 2008, 49: 75-87
[12] 黃晨陽, 陳強, 高山, 等. 側耳屬主要種類ITS序列分析[J]. 菌物學報, 2010, 29: 365-372
[13] Tamura K, Dudley J, Nei M, et al. MEGA4: molecular evolutionary genetics analysis (MEGA) software version 4.0 [J]. Mol Biol Evol, 2007, 24: 1596-1599
[14]卯曉嵐. 中國大型真菌[M]. 鄭州：河南科技出版社, 2000
[15] 戴玉成, 周麗偉, 楊祝良, 等. 中國食用菌名錄[J]. 菌物學報, 2010, 29: 1-21
*收稿日期: 2010-11-17 修回日期：2010-12-17
基金項目：公益性行業（農業）科研專項（3-27）
作者簡介：黃晨陽，博士，主要從事食用菌遺傳育種研究。
通訊作者：張金霞，研究員。E-mail: zhangjx1210@yahoo.com.cn
