【作者】姜露熙 王俊杰 李娜 徐軍偉

【機構】昆明理工大學生命科學與技術學院 昆明理工大學理學院

摘要：首先采用熒光定量PCR的方法通過分析在液體靜置和振蕩培養條件下基因的表達量對靈芝(Ganoderma lingzhi)細胞中14個與類固醇結合的P450基因進行篩選;其次在不同培養條件下(振蕩、靜置、靜置鈣離子添加和靜置氮缺陷)通過分析靈芝酸T積累與P450基因表達的相關性對差異表達顯著的P450基因進行進一步篩選;最后通過反義RNA技術對所篩選出的基因進行沉默,分析在靈芝細胞內沉默該基因對靈芝酸T含量的影響。結果表明:14個P450基因中,5個基因(cyp512a3、cyp512a11、cyp5144n1、cyp512u4、cyp512v2)的表達量在靜置培養條件下顯著高于振蕩培養條件,差異表達倍數分別為7.2、3.7、3.4、89.8、63.4;cyp512v2基因的表達與靈芝酸T的積累顯著相關;三株cyp512v2基因沉默效率較高的菌株中靈芝酸T含量分別比野生型菌株的含量降低13%、69%、66%,表明cyp512v2在靈芝酸T的生物合成過程中具有重要的作用。 

基金：國家自然科學基金(21566016和31360495)；

關鍵詞：靈芝; 靈芝酸; 甲羥戊酸途徑; 細胞色素P450; 反義RNA技術;