【作者】賴衛華 許楊 熊勇華

【機構】教育部食品科學重點實驗室南昌大學食品科學工程系 教育部食品科學重點實驗室.中德聯合研究院教育部食品科學重點實驗室.中德聯合研究院 南昌330047

【摘要】應用抑制性消減雜交技術,構建紅曲菌產桔霉素和不產桔霉素差異表達的cDNA消減文庫。分別從產桔霉素和不產桔霉素的紅曲菌絲體中提取mRNA,依次合成單鏈和雙鏈cDNA,經酶切成大小為250~750bp的片斷,將產桔霉素的cDNA分為兩組,分別與兩種不同的接頭連接,再與不產桔霉素的紅曲菌的cDNA進行兩次消減雜交及兩次抑制性PCR后,將產物與T/A載體連接構建成功cDNA消減文庫,并轉染大腸桿菌進行文庫擴增,文庫擴增后得到283個克隆,經PCR法快速測定,均得到250~750bp的插入片斷。所構建的紅曲菌cDNA消減文庫為進一步篩選紅曲菌中與產桔霉素性狀相關的基因奠定了基礎。  

【基金】國家自然科學基金資助項目；

【關鍵詞】桔霉素; 抑制性消減雜交; 聚合酶鏈式反應;