第一節 培養基的制備
一、配制原則和種類
(一)培養基配制原則
1、培養基:培養基是提供食用菌等生物生長發育所需的營養與特定環境條件的基質,如蘑菇菌是有機營養型中的草腐生菌。制備培養基不僅要考慮它所需要的含碳化合物、含氮化合物、礦物鹽類、生長因子,還要考慮水與pH環境,同時還應考慮它們培養方式是固體培養還是液體培養。因此,可以把按菌類生長發育需要比例配制的滅菌營養基質,稱為培養基。換言之,培養基必須具備三個條件:含有菌株生長發育所需要的營養物質;具有菌類生長環境條件;經過滅菌,并保持無菌狀態。
2、培養基的選擇:在整菌種制備過程中,從母種到原種、栽培種,各個階段的目的要求有所不同,所選用的培養基的配比也應有所區別。一般母種初生菌絲較嫩弱,分解養分能力差,要求營養豐富、完全,氮源、維生素的比例應高。須選用易于被菌絲吸收利用的物質,如葡萄糖、蔗糖、馬鈴薯、蛋白胨、無機鹽類及生長素等為等而原種、栽培種所需數量較多,且菌絲分解能力強,可利用大量農作物秸稈、糞草、棉籽殼、麩皮、米糠等原料作為培養基。
(二)培養基的種類
1、根據營養物質的來源,可以把培養基分炎天然培養基、半合成培養基和合成培養基。
(1)天然培養基 天然培養基是指用化學成分還不清楚或化學成分不恒定天然有機物配制而成的培養基,如各種農副產品及其下腳料──小麥、大豆、玉米粉、麩皮、米糠、 作物秸稈、木屑、棉籽殼、甘蔗渣等,以及動植物組織的浸出液──牛肉膏、肉湯、馬鈴薯汁、麥芽汁、豆芽汁等都可以用來配制天然培養基,這種培養基來源廣,成本低,營養豐富,適合于在生產上大規模培養菌類使用,但這些天然有機物質因產地、品種、生長期的不同,化學成分不能宣。每批成分也不穩定,不宜用來做精細的科學實驗。以分離馴化食用菌培養基
(2)半合成培養基 為了促進食用菌菌絲的生長發育,常在天然培養基中添加適量的無機鹽類,或在合成培養基中添加適量的某些天然有機物,就成為半合成培養基。這類培養基種類繁多,應用廣泛,也是生長菌種和實際栽培最常用的培養基。
(3)合成培養基 是指采用化學成分已知的有機物(碳水化合物、含氮化合物、有機酸類)或無機物配制而成的培養基。這類培養基組成和含量明確,價格較貴,一般用于在實驗室范圍內做有關營養、代謝、菌種鑒定等有關于食用菌的生理生化研究。
2、根據培養基制成后的物理狀態,可將培養基分為液體培養基、半固體培養基和固體培養基。
(1)液體培養基 根據食用菌所需的營養物質,掃一定比例配成營養液,叫液體培養基。液體培養基可進行營養源的篩選實驗,以及生理生化方面如酶活力等研究,應用液體培養基生產的菌種也可在生產中進行使用。
(2)固化培養基 將各種營養成份按比例配制成營養液后,加入適量固化劑,如瓊脂,即可配成固化培養基。利用這種斜面試管可保藏及擴大菌種,同時亦可制成各種平皿固化培養基分離菌種。
(3)固體培養基 利用各種富含纖維素和木質素的農林廢棄物如木屑、棉籽殼、秸稈、玉米蕊等作為主要原料,再加入適量的米糠或麩皮和無機鹽類制成固體培養基。該培養基可作為二、三、級菌種生產用的培養基,也可以用它制成發酵草粉保藏菌種用的培養基。
二、一級種培養基
一級種又稱母種,其培養基一般用試管作為容器,所以又稱試管斜面培養基,這類培養基又常用于菌種分離提純,擴大,轉管及菌種保存等,下面列舉蘑菇菌種生產常用配方。
1.馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基(PDA)
馬鈴薯(去皮) 200克 葡萄糖 20克 瓊脂 18-20克 水1000亳升
2.馬鈴薯綜合培養基(CPDA)
馬鈴薯200克 葡萄糖 20克 磷酸二氫鉀 3克 硫酸鎂 1.5克
維生素B1 0.05毫克 瓊脂18-20克 水1000毫升
3.馬鈴薯酵母膏培養基(PDYA)
馬鈴薯200克 葡萄糖20克 酵母膏 1.5克 瓊脂 18-20克 水1000毫升
4.麩皮葡萄糖培養基
麩皮 50-70克 葡萄糖 20克 瓊脂 18-20克 水1000毫升
5.堆肥浸汁葡萄糖培養基
堆肥(干) 100克 葡萄糖20克 瓊脂 18-20克 水1000毫升
6.玉米粉綜合培養基
玉米粉 20-30克 葡萄糖 20克 磷酸氫二鉀 1克 硫酸鎂 0.5克
蛋白胨 1克 瓊脂 18-20克 水1000毫升
9.E.B.Lamberr 培養基
葡萄糖 10克 硫酸鎂 0.5克 磷酸二氫鉀 1.9克 瓊脂 20克 水1000毫升
適合于雙孢蘑菇的擔孢子萌發
三. 二、三級種培養基
二、三級種培養基通常采用天然營養物質,如秸稈、棉籽殼、蔗渣等農作物廢物,加適量的無機鹽類等制成固體培養基,現將常用的培養基配方介紹如下。
1.糞草培養基
發酵麥稈72% 發酵牛糞粉20% 麩皮5% 糖1% 磷酸鈣1% 石膏1% 含水量62-65% 適合二級種
2.牛糞粉培養基
發酵牛糞粉98% 碳酸鈣2% 含水量62-65% 適合二級種
3.棉籽殼培養基
發酵棉籽殼97% 過磷酸鈣1% 碳酸鈣1% 石灰1% 適合二,三級菌種
4.羊糞培養基
干羊糞98% 碳酸鈣2% 含水量62-65% 適合二級種
5.礦石培養基
膨脹珍珠巖1450克 麩皮1650克 石膏粉200克 碳酸鈣50克 水1650克 pH6.2-6.4 適合二級種生產
6.谷粒培養基
麥粒(小麥,大麥,燕麥,高梁等)97% 碳酸鈣2% 石膏1% 含水量50-55% pH6.5- 7.0 適合二,三級種
7.小麥稻谷培養基
小麥88% 稻谷10% 碳酸鈣2% 適合三級種
8.小麥牛糞粉培養基
小麥88% 牛糞粉10% 碳酸鈣2% 適合三級種