【作者】鄭艷 周波 宋寧寧 李多川
【機構】山東農業大學微生物系
【摘要】疏棉狀嗜熱絲孢菌Thermomyces lanuginosus可產生具有重要工業生產價值的脂肪酶。根據已報道的相應序列設計特異引物,綜合運用PCR、RT-PCR技術克隆到脂肪酶基因的全長DNA和cDNA序列。其中DNA序列長1071bp,包含876bp的開放閱讀框以及3段內含子;cDNA序列長885bp。結構基因編碼蛋白包含292個氨基酸,前17個氨基酸構成信號肽。序列提交GenBank,登錄號分別為EU022703和EU370914。將脂肪酶基因cDNA序列的開放閱讀框克隆到酵母分泌型表達載體pPIC9K中,轉化畢赤酵母GS115得到重組子且實現了分泌表達。將重組子誘導產酶,在培養溫度30℃、甲醇添加量1%的情況下,小規模發酵量達0.93mg/mL,其分泌表達的最高酶活為7.2U/mL。重組酶最適反應溫度和pH分別是60℃和8.0。表達蛋白在60℃保溫1h后仍有完全酶活,具有較高的熱穩定性。
【基金】國家“863”計劃(No.2006AA10Z304)；
【關鍵詞】內含子; 成熟蛋白; 誘導; 分泌表達; 重組酶; 最適反應溫度; 最適反應pH; 熱穩定;