【作者】丁一新 趙明文
【機構】南京農業(yè)大學生命科學學院農業(yè)部農業(yè)微生物環(huán)境工程重點開放實驗室南京農業(yè)大學生命科學學院農業(yè)部農業(yè)微生物環(huán)境工程重點開放實驗室 南京210095
【摘要】根據已報道的lz8基因序列設計引物,以靈芝基因組DNA為模板,PCR擴增獲得lz8基因。構建了原核表達載體pET30a-lz8,轉化原核表達宿主菌RosettaDE3,IPTG誘導融合蛋白表達,并用Ni-NTA親和層析柱對LZ-8蛋白進行分離純化。將純化的LZ-8蛋白用Freund佐劑乳化后注射到新西蘭白兔體內,經數次加強免疫后采血分離抗血清,并以抗血清為探針建立了LZ-8蛋白的免疫印跡法定性檢測方法。
【基金】國家自然科學基金(30300006,30571294)； 江蘇省自然科學基金創(chuàng)新人才項目(BK2006517)資助；
【關鍵詞】載體構建; 異源表達; Western雜交;