【作者】王建榮；張曼夫；

【機構】上海市農業科學院畜牧獸醫研究所；北京農業大學生物學院 上海 200030；北京 100094；

【摘要】本文以噬菌體lambda EMBL3 DNA為載體,通過克隆綠色木酶(Trichoderma viride)高分子量基因組DNA的部分酶解片段,并將重組分子進行體外包裝后侵染Escherichia.coli K802,由此構建了綠色木霉基因文庫。以李氏木霉(Trichoderma reesei)纖維素酶CBHII基因的末端片段為探針,用輪迥噬菌斑原位雜交從文庫中篩選出CBHII基因的陽性克隆5個,隨機取其中3個克隆用上述探針作斑點雜交,結果進一步證明克隆了全長或近全長的綠色木霉CBHII基因,用李氏木霉CBHI基因的末端片段探針作斑點雜交,結果提示CBHI與CBHII基因的末端序列之間無同源性存在。從斑點雜交的陽性克隆中提取DNA,酶切鑒定插入片段的長度,并克隆于質粒pUC19,Southern雜交結果證明獲得了含綠色木霉CBHII基因的重組質粒pCBHII-14。   

【關鍵詞】木霉；纖維二糖水解酶；基因文庫；分子雜交；克隆；

【基金】國家高技術發展計劃863項目；江蘇省應用基礎研究項目；

【分類號】Q943

【文內圖片】