摘要：設計能夠鑒定小菇屬真菌(Mycena sp.)的引物,可準確而快速發現萌發菌分離材料,從而分離小菇屬真菌,對提高天麻種子萌發率及天麻產量具有重要現實價值。同時對全面了解小菇屬真菌在自然環境中的物種分布情況具有一定生態學意義。根據適用于檢測"環境DNA"中某物種的引物設計驗證框架,運用Primer Premier v5.0軟件,在ITS序列區間內設計了適用于小菇屬真菌DNA快速檢測的5對引物,并對他們的特異性、靈敏度和實際運用能力進行了評估。其中,特異性較好的4對引物分別為M52-2、M22-3、M11-4和BZZ-5。通過對來自3個門、125個屬的125株真菌進行特異性測試,能測出的菌株數量分別為2.4%、6.4%、4.0%和7.2%。靈敏度較好的M22-3和BZZ-5兩對引物能檢測到小菇屬真菌菌絲在土壤中的最小濃度均為0.033%,且能成功從天麻原球莖和種子萌發菌塘土壤樣本總DNA中檢測出小菇屬真菌的存在。結果表明,經過利用2對和多對引物,可在實際運用中快速篩選和發現小菇屬真菌。
基金：國家自然科學基金(31360153)； 2015年度昭通天麻共生優良“兩菌”選育項目(201501)；
關鍵詞：天麻萌發菌; 蘭科植物; ITS基因; 靈敏度; 快速篩選;