摘要：設(shè)計(jì)能夠鑒定小菇屬真菌(Mycena sp.)的引物,可準(zhǔn)確而快速發(fā)現(xiàn)萌發(fā)菌分離材料,從而分離小菇屬真菌,對(duì)提高天麻種子萌發(fā)率及天麻產(chǎn)量具有重要現(xiàn)實(shí)價(jià)值。同時(shí)對(duì)全面了解小菇屬真菌在自然環(huán)境中的物種分布情況具有一定生態(tài)學(xué)意義。根據(jù)適用于檢測(cè)"環(huán)境DNA"中某物種的引物設(shè)計(jì)驗(yàn)證框架,運(yùn)用Primer Premier v5.0軟件,在ITS序列區(qū)間內(nèi)設(shè)計(jì)了適用于小菇屬真菌DNA快速檢測(cè)的5對(duì)引物,并對(duì)他們的特異性、靈敏度和實(shí)際運(yùn)用能力進(jìn)行了評(píng)估。其中,特異性較好的4對(duì)引物分別為M52-2、M22-3、M11-4和BZZ-5。通過(guò)對(duì)來(lái)自3個(gè)門、125個(gè)屬的125株真菌進(jìn)行特異性測(cè)試,能測(cè)出的菌株數(shù)量分別為2.4%、6.4%、4.0%和7.2%。靈敏度較好的M22-3和BZZ-5兩對(duì)引物能檢測(cè)到小菇屬真菌菌絲在土壤中的最小濃度均為0.033%,且能成功從天麻原球莖和種子萌發(fā)菌塘土壤樣本總DNA中檢測(cè)出小菇屬真菌的存在。結(jié)果表明,經(jīng)過(guò)利用2對(duì)和多對(duì)引物,可在實(shí)際運(yùn)用中快速篩選和發(fā)現(xiàn)小菇屬真菌。
基金：國(guó)家自然科學(xué)基金(31360153)； 2015年度昭通天麻共生優(yōu)良“兩菌”選育項(xiàng)目(201501)；
關(guān)鍵詞：天麻萌發(fā)菌; 蘭科植物; ITS基因; 靈敏度; 快速篩選;