【作者】紀策 劉源 李丹 Sossah Frederick Leo 楊陽 付永平 李玉
【機構】吉林農業大學食藥用菌教育部工程研究中心
摘要：有害疣孢霉Hypomyces perniciosus是引起雙孢蘑菇Agaricus bisporus濕泡病的病原真菌,目前其致病分子機理尚不清楚,而高效穩定的遺傳轉化體系和突變體庫構建是挖掘和研究病原菌致病基因的基礎和有效手段。因此,本實驗以高致病力的有害疣孢霉菌株WH001為研究對象,采用凍融法將雙元載體p BHt1轉入農桿菌AGL-1中,建立并優化根癌農桿菌介導的遺傳轉化體系,并利用其構建T-DNA插入突變體庫。結果表明有害疣孢霉菌株WH001的潮霉素(Hygromycin,Hyg)耐受濃度為250ng/L,當農桿菌侵染液濃度OD600=1,侵染時間為30min,乙酰丁香酮(Acetosyringone,AS)濃度為1.5mg/mL,共培養時間為3d時,轉化體系效率最高。然后利用該優化體系構建有害疣孢霉的突變體庫,通過PCR檢測和形態學鑒定獲得若干表型發生改變、穩定遺傳的T-DNA插入突變體,與原菌種WH001相比,突變體在菌絲形態、生長速率、色素分泌和致病力等方面發生改變。本研究為進一步挖掘有害疣孢霉未知基因功能、解析生物學性狀、探討致病分子機制奠定基礎。
基金：公益性行業(農業)科研專項(201503137)； 國家重點基礎研究發展規劃(973計劃)(2014CB138305)； 國家自然科學基金(31471926)~~；
關鍵詞：有害疣孢霉; 農桿菌; 轉化; 突變體庫; 表型變異;